細(xì)胞凍存是細(xì)胞生存的重要要領(lǐng)之一。使用凍存技能將細(xì)胞置于-196~C液氮中低溫生存,可以使細(xì)胞臨時離開生長狀態(tài)而將其細(xì)胞特性生存起來,如許在必要的時間再蘇醒細(xì)胞用于實行。
細(xì)胞凍存是細(xì)胞生存的重要要領(lǐng)之一。使用凍存技能將細(xì)胞置于-196~C液氮中低溫生存,可以使細(xì)胞臨時離開生長狀態(tài)而將其細(xì)胞特性生存起來,如許在必要的時間再蘇醒細(xì)胞用于實行。并且適度地生存肯定量的細(xì)胞,可以防備因正在造就的細(xì)胞被污染或其他不測變亂而使細(xì)胞丟種,起到了細(xì)胞保種的作用。除此之外,還可以使用細(xì)胞凍存的情勢來購置、寄贈、互換和運(yùn)送某些細(xì)胞。細(xì)胞凍存時向造就基中參加掩護(hù)劑——終濃度5%~15%的甘油或二甲基亞砜(DMSO),可使溶液冰點低落,加之在遲鈍凍結(jié)條件下,細(xì)胞內(nèi)水分透出,淘汰了冰晶形成,從而制止細(xì)胞毀傷。尺度冷凍速率開始為-1到-2℃/min,當(dāng)溫度低于-25℃時可加快,到-80℃之后可直接投入液氮內(nèi)(-196℃)。
MVE液氮罐
現(xiàn)在常用的掩護(hù)劑為二甲亞砜(DMSO)和甘油,它們對細(xì)胞無毒性,分子量小,溶解度大,易穿透細(xì)胞。
實行步調(diào)
1.消化細(xì)胞,將細(xì)胞懸液網(wǎng)絡(luò)至離心管中。
2.1000rpm離心10分鐘,棄上清液。
3.沉淀加含掩護(hù)液的造就,計數(shù),調(diào)解至5106/ml左右。
4.將懸液分至凍存管中,每管1ml。
5.將凍存管口封嚴(yán)。如用安瓿瓶則火焰封口,封口肯定要嚴(yán),不然蘇醒時易出現(xiàn)爆裂。
6.貼上標(biāo)簽,寫明細(xì)胞種類,凍存日期。凍存管外拴一金屬重物和一細(xì)繩。
7.按下列次序降溫:室溫→4℃(20分鐘)→冰箱冷凍室(30分鐘)→低溫冰箱(-30℃1小時)→氣態(tài)氮(30分鐘)→液氮。
細(xì)致:操縱時應(yīng)警惕,以免液氮凍傷。液氮定期查抄,隨時增補(bǔ),不克不及揮發(fā)潔凈,一樣通常30立升的液氮能用1~1.5月。
MVE液氮罐